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Coexistence de l’antigène de surface de l’hépatite B HBsAg et d’anticorps spécifiques de sous-types hétérologues à l’HBsAg chez les patients atteints d’une infection chronique par le virus de l’hépatite B

vendredi, juin 1st, 2018 | Eric | Rhumatologie

Contexte La coexistence de l’antigène de surface de l’hépatite B HBsAg et des anticorps dirigés contre l’HBsAg anti-HBs chez les patients infectés par le virus de l’hépatite B chronique a été expliquée par la présence de mutants d’échappement viral. Méthodologie Quatre cent onze patients atteints d’infection chronique par le VHB ont été testés pour la présence d’anti-HBs. Les séquences de la région codant pour HBsAg ont été analysées. Les anti-HBs ont été purifiés et examinés dans des dosages commerciaux seuls et Vingt patients ont eu des résultats positifs pour les anti-HBs Ce statut sérologique est resté stable pendant des mois comme testé jusqu’ici des substitutions d’acides aminés et / ou des variations sur HBsAg ont été trouvés chez les patients, et les isolats de HBV des autres étaient des types sauvages. différence significative dans l’occurrence des substitutions d’acides aminés dans le HBsAg a été trouvée dans les isolats HBV de p atients avec et sans anti-HBs Les fractions d’immunoglobulines purifiées provenant d’échantillons sériques de patients étaient réactives à HBsAg mais avaient une activité spécifique plus faible que celles des personnes immunisées http://kamagrafrance.eu. Les anti-HB chez les patients étaient dirigés vers les sous-types HBsAg autres que les coexistants. Un complexe immun circulant a pu être détecté chez ces patients. Conclusion: HBsAg et anti-HBs avec une spécificité inégalée coexistaient chez% des patients La présence d’anti-HBs n’était pas associée à l’apparition de mutants HBV spécifiques chez les patients atteints d’infection chronique. -HB chez les patients atteints d’infection chronique par le VHB n’a pas conduit à une sélection de mutants d’échappement HBV

La réponse immunitaire à l’antigène de surface de l’hépatite B HBsAg apparaît au cours de la phase tardive de l’infection. Les anticorps anti-HBsAg anti-HBs peuvent neutraliser l’infectiosité du VHB et, par conséquent, La présence d’anti-HBs est considérée comme un indicateur de l’immunité contre l’infection par le VHB La vaccination par HBsAg s’est avérée efficace pour prévenir l’infection par le VHB La caractéristique sérologique typique de l’infection chronique par le VHB est la présence d’HBsAg. présence d’HBsAg circulante chez les patients et manque d’anti-HBs Cependant, la coexistence d’HBsAg et d’anti-HBs chez les patients atteints d’une infection chronique par le VHB a souvent été rapportée . dirigé vers les sous-types HBsAg différents de l’HBsAg coexistant En raison de limitations techniques, aucune analyse séquentielle des isolats du VHB chez les patients n’a été réalisée en Ces premières études ont suggéré que la présence d’anti-HBs pourrait conduire à la sélection de mutants d’échappement HBsAg Il a été montré que des substitutions d’acides aminés peuvent se produire dans le déterminant a de HBsAg des isolats de HBV et réduire ou abolir la liaison de Cependant, les isolats du VHB provenant de patients atteints d’HBsAg et d’anti-HBs étaient souvent dépourvus de mutations pertinentes dans la région codante de l’HBsAg. Souvent, des isolats de VHB mutants étaient accompagnés d’isolats de type sauvage, formant une population virale mixte chez les patients [,,] Ces faits contredisent l’hypothèse selon laquelle les mutants d’échappement du VHB sont sélectionnés par des anti-HBs coexistants. Dans notre étude, nous avons examiné les séquences HBsAg et la nature des anti-HB chez les patients la relation entre la variation de la séquence HBsAg et la spécificité des anti-HBs Nos résultats indiquent clairement que la présence d’anti-HBs n’était pas corrélée avec un taux plus élevé de substitution d’acides aminés ns dans les séquences HBsAg, comme précédemment spéculé Les anti-HBs chez les patients atteints d’infection chronique par le VHB n’étaient pas capables de se lier à HBsAg chez le même patient

Matériaux et méthodes

Patients De juillet à octobre, des patients chinois consécutifs atteints d’hépatite B chronique de Shanghai, Beijing, Guangzhou et Changchun ont été inclus dans notre étude. Le diagnostic d’hépatite B chronique clinique était basé sur des résultats positifs pour l’HBsAg depuis au moins mois, une augmentation de l’activité alanine aminotransférase Critères d’exclusion: hépatopathie décompensée, traitement antérieur de l’hépatite B chronique et co-infection par le virus de l’hépatite C, le virus de l’hépatite D ou le VIH, au moins la limite supérieure des résultats normaux et positifs pour l’hépatite B Tous les patients ont fourni un consentement éclairé avant l’entrée dans cette étude. Essais sérologiques Des échantillons de sérum ont été prélevés sur des patients et stockés à – ° C Les marqueurs sérologiques de l’infection par le VHB ont été déterminés en utilisant des kits EIA disponibles dans le commerce. Le niveau d’ADN du VHB de Dade Behring Sérum était quantifi Ce kit a été approuvé par la Food and Drug Administration en Chine avec une limite de détection de copies HBV / mL Pour l’étalonnage du dosage, le niveau standard d’ADN du VHB, fourni par l’Institut national pour le contrôle des produits pharmaceutiques et biologiques Chine, a été utiliséExtrait d’ADN à partir d’échantillons de sérum, amplification par PCR, clonage et séquençage de fragments de PCR L’ADN a été extrait d’échantillons de sérum de patients, en utilisant Qiagen à l’amplification PCR en utilisant la Taq polymérase haute fidélité Roche selon les instructions du fabricant La région codant pour HBsAg nt – a été amplifiée en utilisant les amorces FS-S ‘-GTCACCATATTCTTGGGAAC-‘ nt – et FS-AS ‘-CATATCCCATGAAGTTAAGG-‘ nt – , selon la séquence de référence AY, et a été cloné dans le vecteur pCR La PCR a été réalisée sur des cycles, avec min à ° C, min à ° C, et La vitesse de désincorporation des nucléotides était de ~ paires de bases / cycle dans notre condition de PCR, conduisant à une erreur de ~ PCR par paires de bases. L’analyse de séquence a été réalisée directement avec des produits de PCR ou avec de l’ADN clone. Utilisation des amorces DC ‘-GCACACGGAATTCCGAGGACTGGGGACCCTG-‘ nt – et SD ‘-GACACCAAGCTTGGTTAGGGTTTAAATGTATACC-‘ Purification de fractions d’IgG à partir d’échantillons de sérum humain Les fractions d’IgG ont été purifiées à partir d’échantillons sériques de patients par précipitation au sulfate d’ammonium ou par ImmunoPure G IgG Pierce, selon les instructions du fabricant Les quantités d’IgG purifiées ont été déterminées par dosage des protéines Biorad Biorad La réactivité des anticorps anti-HBs purifiés contre HBsAg a été déterminée par ELISADetection des anti-HBs spécifiques des sous-types Des échantillons sériques ont été incubés avec des échantillons HBsAg recombinants sous-types adw génotype A, génotype adr B, et ayw génotype D à une concentration de μg / mL pour min puis testé n un essai commercial anti-HBs Abbott Laboratories

Résultats

Patients testés positifs à la fois pour HBsAg et anti-HBs Vingt patients atteints d’infection chronique par HBV ont obtenu des résultats positifs pour les anti-HBs dans différents tests ELISA commerciaux. En outre, les patients avaient des résultats positifs pour les anti-HBs seulement. le tableau d’analyse montre les caractéristiques cliniques des groupes de patients Il n’y avait pas de différence significative entre les patients avec et sans anti-HBs en ce qui concerne l’âge, le sexe, le taux sérique d’alanine aminotransférase, le taux sérique d’HBeAg et le taux sérique d’HBsAg. les anti-HBs présentaient des concentrations sériques plus faibles d’ADN du VHB que les patients sans anti-HBs détectables P =

Tableau View largeTélécharger une diapositive Comparaison des caractéristiques démographiques, cliniques et virologiques des patients atteints du virus de l’hépatite B chronique entre les anticorps dirigés contre l’hépatite B antigène de surface anti-HBs-positif et -négatif groupTable Voir grandDownload slideComparaison des caractéristiques démographiques, cliniques et virologiques des patients virus de l’hépatite B chronique entre les anticorps anti-hépatite B antigène de surface anti-HBs positif et négatif Les sérums sérologiques des patients JJ, YPF et WZM ont été collectés pendant plusieurs mois. Tous les patients ont eu des résultats positifs pour HBsAg et anti-HBs pendant ce chiffre de période; en ligne seulement, indiquant qu’un tel statut sérologique chez les patients peut rester stable pendant une période prolongée

Figure vue grandDownload glissementDynamic changements d’anticorps en série contre l’antigène de surface de l’hépatite B anti-HBs; ▴, antigène de surface de l’hépatite B HBsAg; ♦, taux d’ALAT de l’alanine aminotransférase, et taux sérique d’ADN du VHB dans le sérum de l’hépatite B ■ dans des échantillons sériques de patients représentatifs A et B, Patients JJ C et D, Patients YPF E et F, Patient WZMFigure View largeTélécharger slideDynamic les changements d’anticorps en série contre l’antigène de surface de l’hépatite B anti-HBs; ▴, antigène de surface de l’hépatite B HBsAg; ♦, taux d’ALAT de l’alanine aminotransférase, et taux sérique d’ADN du VHB dans le sérum de l’hépatite B ■ dans des échantillons sériques de patients représentatifs A et B, Patients JJ C et D, Patients YPF E et F, Patient WZMThe anti-HBs Les résultats détaillés sont listés dans le tableau Les tests ont fourni des valeurs différentes pour les mêmes échantillons Néanmoins, les échantillons avec des titres anti-HBs élevés dans un test ont eu tendance à avoir une valeur élevée dans d’autres dosages figure A; En ligne seulement Ainsi, les différents tests ont systématiquement défini la gamme de titres anti-HBs

Diapositive des caractéristiques cliniques des patients présentant à la fois l’antigène de surface de l’hépatite B HBsAg et les anticorps contre l’hépatite B antigène de surface anti-HBsTable View largeTélécharger le résumé des caractéristiques cliniques des patients présentant à la fois l’antigène HBsAg de l’hépatite B et les anticorps anti HBs

Les images des anticorps contre l’antigène de surface de l’hépatite B, l’antigène de surface de l’hépatite B HBsAg et le taux d’ADN du VHB du virus de l’hépatite B chez les patients atteints d’infection chronique par le VHB ont des résultats positifs. Les titres d’HBs mesurés à l’aide des tests de diagnostic Roche et Abbott et comparés dans la parcelle B, les niveaux de sérum HBsAg et les titres anti-HBs déterminés par le dosage Abbott C, les niveaux de sérum HBsAg et les concentrations d’ADN HBV D, les titres sériques anti-HBs Relation entre les anticorps anti-HBs de l’hépatite B, l’antigène HBsAg de l’antigène de surface de l’hépatite B et le taux d’ADN du VHB du virus de l’hépatite B chez les patients infectés par le VHB. Les titres sériques anti-HBs ont été mesurés en utilisant des dosages de diagnostic Roche et Abbott et comparés dans le lot B, les niveaux de sérum HBsAg et les titres anti-HBs déterminés par le dosage Abbott C, Les taux sériques d’HBsAg et les concentrations d’ADN HBV D, les titres sériques anti-HBs mesurés par le dosage Abbott et les concentrations sériques d’ADN HBVHBsAg ont varié du rapport signal sur bruit dans ce groupe de patients figure B; en ligne seulement Les transferts de titres sériques d’HBsAg et les concentrations d’ADN sérique du VHB contre les titres anti-HBs n’indiquaient pas de corrélation entre ces paramètres chez ces patients, figures C et D; L’apparition de mutants du VHB avec des substitutions d’acides aminés sur HBsAg peut être une explication possible de la coexistence d’anti-HBs et d’HBsAg Ainsi, nous avons analysé la séquence codant pour HBsAg des isolats du VHB Les résultats sont résumés en ligne et en figure D Les isolats de VHB analysés provenant de patients avec anti-HBs appartenaient aux génotypes B et C du VHB Quatre isolats du VHB du sous-type B ont été classés dans le sous-type HBsAg selon la séquence d’acides aminés déduite Quinze isolats HBV du sous-type C étaient du sous-type HBsAg adrq et appartenaient au sous-type HBsAg adw Les substitutions d’acides aminés dans la séquence HBsAg sont montrées dans la figure Quatre patients n’avait pas de différences dans les séquences consensus de l’HBsAg des génotypes correspondants Treize patients avaient une ou plusieurs substitutions d’acides aminés et / ou variations à l’intérieur et / ou en dehors du déterminant a de HBsAg La position des acides aminés a révélé des variations d’acides aminés Ile à Thr ou Ser fréquemment rencontrées chez les patients infectés par le VHB chronique Autres isolats de VHB ayant des substitutions d’acides aminés QR, GN, MT et TM dans le déterminant a, qui était similaire aux résultats des études précédentes [, -]

Figure View largeTéléchargement des substitutions d’acides aminés et variations de l’antigène de surface de l’hépatite B HBsAg chez les patients atteints d’hépatite B chronique avec et sans anticorps contre HBsAg anti-HBs Seules de telles positions dans HBsAg sont indiquées si des substitutions d’acides aminés sont présentes Les séquences B et C de type sauvage [wt] B et wt C sont indiquées La partie dans le déterminant a de HBsAg est soulignée Les patients ont été triés en fonction de la présence de substitutions d’acides aminés dans le déterminant a de HBsAg et en dehors de HBsAg. -déterminant ou dans les deux régions Patient YPF avec résidu d’acide aminé K peut être considéré comme un mutant mais ne figure pas dans la figure Pos, les positions des acides aminés dans HBsAgFigure View largeTélécharger slideAmino substitutions acides et variations de l’antigène de surface de l’hépatite B HBsAg dans l’hépatite chronique Patients B avec et sans anticorps dirigés contre HBsAg anti-HBs Seules de telles positions dans HBsAg sont indiquées si des substitutions d’acides aminés étaient présentes Les différences du virus de l’hépatite B Les sous-types B et C de type sauvage B et C de type HBV sont indiquées La partie du déterminant a de l’HBsAg est soulignée Les patients ont été triés en fonction de la présence de substitutions d’acides aminés dans le HBsAg-déterminant et en dehors du déterminant a HBsAg-a ou dans les deux régions YPF patient avec le résidu d’acide aminé K peut être considéré comme un mutant mais ne figure pas dans la figure Pos, les positions des acides aminés dans HBsAg

La région codante de HBsAg nt – selon la séquence avec le numéro d’accès GenBank, AY a été amplifiée par PCR en utilisant des amorces décrites dans la section Matériels et Méthodes. Les produits de PCR ont été soumis à Séquençage direct et clonage Pour chaque patient, ⩾ clones de produits PCR ont été générés et soumis au séquençage Les séquences d’acides aminés déduites de HBsAg sont alignées Les séquences d’acides aminés déduites indiquées avec YPF, WXG, JJ et WZM ont été dérivées du séquençage direct de PCR La séquence codante de HBsAg nt – selon la séquence avec le numéro d’accès GenBank, AY a été amplifiée par PCR en utilisant les amorces décrites dans la section Matériels et Méthodes. ont été soumis à un séquençage direct et à un clonage Pour chaque patient, ⩾ clones de produits PCR Les séquences d’acides aminés déduites de HBsAg sont alignées Les séquences d’acides aminés déduites indiquées avec YPF, WXG, JJ, et WZM ont été dérivées du séquençage direct des produits de PCR * Des séquences de codons stop aux clones ont été générées et séquencées pour des échantillons de patients représentatifs YPF, WXG, JJ, et WZM figure D; Chacun des clones de ces patients présentait des différences à diverses positions par rapport à la séquence correspondante dérivée de l’analyse directe de séquençage. Ces différences dans les séquences étaient présentes dans les échantillons de patients, car les artefacts PCR ne généraient que des mutations dans les clones. avaient des substitutions d’acides aminés et / ou des variations TA, QR et GN La substitution d’acides aminés TK était trouvée dans des clones. En outre, les clones WZM-C et -C avaient des substitutions d’acides aminés supplémentaires LS, LI et FL. Les séquences HBsAg des patients atteints d’une infection chronique par le VHB sans anti-HBs ont été analysées. Quatorze patients ont été infectés par le VHB du sous-type génotype B / HBsAg. Les isolats du VHB chez les patients appartenaient au génotype C / HBsAg sous-type adrq A total des substitutions d’acides aminés et / ou des variations ont été trouvées dans le déterminant a de l’AgHBs. Environ la moitié des substitutions d’acides aminés se sont produites à la position de l’acide aminé de HBsAg. Par conséquent, les fréquences des substitutions d’acides aminés et / ou des variations étaient comparables chez les patients avec et sans anti- HBs dans les séquences HBsAgAnti-HBs chez les patients Une autre explication de la coexistence d’anti-HBs et HBsAg pourrait être que la capacité de liaison des anti-HBs de ces patients à HBsAg est faible. Nous avons donc caractérisé les anti-HBs de ces patients et de Les sujets ayant reçu un test ELISA anti-HBs à l’aide d’anticorps spécifiques IgG et IgM humains ont révélé que des IgG et des IgM spécifiques de HBsAg étaient présentes dans les échantillons de sérum des patients, ainsi que dans des échantillons de sérum provenant de personnes vaccinées données non montrées Les fractions d’IgG provenant d’échantillons de sérum de patient ont été purifiées et testées pour la liaison d’anti-HBs à HBsAg. Les IgG purifiées provenant de personnes vaccinées étaient fortement réactives à l’HBsAg dans les tests ELISA A et C Toutes les préparations d’IgG purifiées ont été ajustées à une concentration de mg / mL et testées dans un ELISA anti-HBs commercial. Six échantillons de personnes vaccinées -HBs titres & gt; mUI / mL Les préparations d’IgG diluées de mg / mL de ces échantillons avaient des titres anti-HBs allant de mUI / mL échantillons de sérum provenant de personnes vaccinées – avaient des titres anti-HBs plus bas – mUI / mL En conséquence, les préparations d’IgG ajustées en mg / mL a montré des titres anti-HBs de – mUI / mL En général, la réactivité des préparations d’IgG à mg / mL correspondait à% -% des titres anti-HBs des échantillons de sérum figure E Un titre anti-HBs exceptionnellement élevé de mUI / mL a été mesurée dans la préparation d’IgG à partir d’échantillons de sérum

ont été testés pour la réactivité à l’antigène de surface de l’hépatite B HBsAg dans le test ELISA anti-HBs. Titres anti-HBs pour les échantillons sériques de sujets vaccinés et sujets témoins B, titres anti-HBs pour les échantillons sériques de patients atteints de HBsAg et anti-HBs C, titres anti-HBs pour les fractions IgG provenant d’échantillons sériques de personnes vaccinées et témoins sujets, titres anti-HBs pour les fractions IgG provenant d’échantillons sériques de patients atteints d’HBsAg et d’anti-HBs E, les rapports des titres anti-HBs dans les fractions IgG et les échantillons sériques correspondants présentés en pourcentages pour les sujets vaccinés et le sujet témoin. ratios des titres anti-HBs dans les fractions IgG et les échantillons sériques correspondants présentés en pourcentages pour les patients avec HBsAg et anti-HBs Les patients avec HBsAg et anti-HBs – dans cette expérience sont WXG, XZT, YPF, HJ, ZQH, LWC, CZY, JJW, LF, JXJ, LFF, et SWJFigure Voir largeDownload réactivité slideThe d’anticorps dirigés contre l’antigène de surface de l’hépatite B anti-HBs dans des fractions d’IgG de sérum et on le purifie par des personnes vaccinées et les patients atteints d’hépatite chronique Infection par le VBB avec des fractions IgG anti-HBs ont été purifiées à partir d’échantillons sériques de sujets vaccinés – sujets témoins négatifs anti-HBs et patients atteints d’infection chronique par HBV avec anti-HBs Des sérums et des fractions IgG purifiées ont été testés pour la réactivité à l’hépatite Antigène de surface B HBsAg en anti-HBs ELISA A, titres anti-HBs pour des échantillons sériques de sujets vaccinés et sujets témoins B, titres anti-HBs pour des échantillons sériques de patients atteints de HBsAg et anti-HBs C, titres anti-HBs pour IgG des fractions d’échantillons sériques provenant de personnes vaccinées et du sujet témoin D, des titres anti-HBs pour des fractions d’IgG provenant d’échantillons sériques de patients atteints d’HBsAg et d’anti-HBs E, les rapports des titres anti-HBs dans les fractions IgG Les ratios de titres anti-HBs dans les fractions IgG et les échantillons de sérum correspondants présentés en pourcentages pour les patients avec HBsAg et anti-HBs Les patients avec HBsAg et anti-HBs – en cette expérience sont WXG, XZT, YPF, HJ, ZQH, LWC, CZY, JJW, LF, JXJ, LFF, et des échantillons de sérum SWJTwelve provenant de patients avec des résultats positifs à la fois pour HBsAg et anti-HBs ont été disponibles pour la purification de fractions d’IgG L’IgG Les préparations de patients ayant des résultats positifs à la fois pour HBsAg et anti-HBs avaient une réactivité très faible à une concentration de mg / mL. Figure B et D La réactivité de la préparation d’IgG était inférieure au mIU / mL de coupure. de nombreux échantillons de sérum avec des titres élevés & gt; IU / L des patients WXG, XZT et HJ avaient une faible réactivité de, et mUI / mL, respectivement. Seule l’IgG du patient YPF avait une réactivité anti-HBs de mUI / mL. La réactivité des préparations d’IgG à mg / mL correspondait à% -% des titres anti-HBs des échantillons de sérum figure F La seule exception, le patient JXJ, avait un titre anti-HBs de mUI / mL dans la concentration en IgG mg / mL Ainsi, les IgG anti-HB chez les patients HBsAg et anti-HBs étaient réactifs à HBsAg mais avec une réactivité inférieure, comparés à ceux des personnes vaccinées. La spécificité des anti-HBs dans les échantillons sériques des patients aux sous-types HBsAg Il a été rapporté que les anti-HBs chez les patients infectés chroniquement HBV peuvent être sélectivement dirigé vers les sous-types d’HBsAg pour détecter le sous-type spécifique anti-HBs, des échantillons de sérum de patients à des dilutions appropriées: à: ont été préincubées avec des échantillons de HBsAg recombinant de la sous-types génotype adw A, adr génotype C, et ayw génotype D normal anti-HBs positif échantillons de sérum provenant de personnes vaccinées b négatif dans les immunodosages anti-HBs après préincubation avec des spécimens de chacun des sous-types recombinants de la figure HBsAg Approximativement g de HBsAg étaient suffisants pour absorber complètement les anti-HBs avec un titre & gt; mUI / mL Pour les échantillons de sérum de patients LWC et YPF, qui ont été infectés par le sous-type VHB ADW, pré-incubation avec des échantillons de HBsAg des sous-types ADW et adr n’a pas changé les titres anti-HBs pré-incubation avec des échantillons de sous-type HBsAg ayw conduit à une neutralisation complète de la réactivité anti-HBs dans ces échantillons de sérum, indiquant que les anti-HB chez ces patients étaient dirigés contre le déterminant du sous-type HBsAg Six patients HJ, JJ, WZM, ZYJ, XZT et ZQH ont été infectés par le sous-type HBV avec des spécimens de adr sous-type HBsAg n’a pas réduit la réactivité anti-HBs des échantillons de sérum, mais la réactivité anti-HBs a été réduite après pré-incubation avec des échantillons de sous-type HBsAg ADW les échantillons sériques restants des patients HJ et ZYJ est devenu anti-HBs négatif ELISA après une préincubation avec des échantillons de sous-type HBsAg ayw Par conséquent, tous les échantillons testés jusqu’à présent contenaient un anti-HBs spécifique dirigé contre un déterminant du sous-type HBsAg.

La réaction des anticorps sériques positifs contre l’antigène de surface de l’hépatite B anti-HBs dans un immunodosage anti-HBs après préincubation avec des échantillons d’antigène de surface de l’hépatite B recombinante HBsAg sous-types adw, adr et ayw Des échantillons de sérum de patients ont été dilués dans du PBS: et incubé avec HBsAg recombinant à une concentration de μg / mL pendant min et testé, par la suite, dans un essai anti-HBs Abbott LaboratoriesFigure View largeTélécharger la réactivité des anticorps sériques positifs contre l’antigène de surface hépatite B anti-HBs dans un immunodosage anti-HBs après pré-incubation avec des échantillons d’antigène de surface de l’hépatite B recombinante HBsAg sous-types adw, adr et ayw Des échantillons sériques de patients ont été dilués dans du PBS et incubés avec HBsAg recombinant à une concentration de μg / mL pendant min et testés ensuite dans un anti-HBs Laboratoire Abbott LaboratoriesLa liaison d’anti-HBs à HBsAg dans le sérum Les complexes immuns circulants constitués de HBsAg et d’anti-HBs ont été Une partie des anti-HBs spécifiques pourrait être impliquée dans les complexes immuns circulants et, par conséquent, ne pas être détectable dans les tests ELISA. Ainsi, nous avons testé si HBsAg et les anti-HBs formaient des complexes par épuisement. des IgG sériques qui conduiraient à l’élimination concomitante de HBsAgs lié aux IgG anti-HBs. La figure montre un exemple de ces expériences. Le patient YPF avait un titre élevé d’anti-HBs & gt; mUI / mL et types sauvages HBsAg ~; Rapport S / N sur des mois Un dixième à un μL de sérum a été incubé avec μL de suspension de protéine G-sépharose Amersham-Pharmacia Biothec pour min à température ambiante, résultant en l’élimination de>% d’IgG testés en ELISA. L’épuisement des IgG n’a pas conduit à une réduction significative des concentrations d’HBsAg. Pour le contrôle, cette même procédure a été capable d’extraire les échantillons d’HBsAg des échantillons de sérum si un μL d’anticorps monoclonaux anti-HB a été ajouté au sérum. Des résultats similaires ont été obtenus avec des échantillons sériques d’autres patients avec des titres anti-HBs plus faibles. Ces résultats ont clairement démontré que les anti-HBs dans les sérums de ces patients ne contribuaient pas significativement à l’élimination du HBsAgs du sang périphérique.

Figure Vue grandDownload slideDéplétion de la fraction IgG à partir d’échantillons de sérum de patient avec la protéine G Deux μL d’un échantillon de sérum du patient YPF avec un titre anti-HBs & gt; IU / L ont été testés pour HBsAg comme suit: après incubation avec μL de solution saline tamponnée au phosphate, après incubation avec μL de protéine G-Sepharose en suspension, après incubation avec μL de protéine G-sépharose en suspension et anticorps monoclonaux contre l’antigène de surface anti-hépatite B HBs Les surnageants d’incubation ont été recueillis et testés pour l’antigène de surface de l’hépatite B HBsAg dans des tests ELISA standard Un échantillon de sérum négatif pour le virus de l’hépatite B a été utilisé comme échantillon de contrôle.Figure 2.Déplétion de la fraction IgG des échantillons de sérum de patient avec la protéine G du patient YPF avec un titre anti-HBs & gt; IU / L ont été testés pour HBsAg comme suit: après incubation avec μL de solution saline tamponnée au phosphate, après incubation avec μL de protéine G-Sepharose en suspension, après incubation avec μL de protéine G-sépharose en suspension et anticorps monoclonaux contre l’antigène de surface anti-hépatite B HBs Les surnageants d’incubation ont été collectés et testés pour l’antigène de surface de l’hépatite B HBsAg dans des tests ELISA standard Un échantillon de sérum négatif pour le virus de l’hépatite B a été utilisé comme échantillon témoin

Discussion

Dans la présente étude, nous avons examiné des patients atteints d’infection chronique par le VHB avec HBsAgs et anti-HBs circulant dans le sang périphérique. Nos résultats indiquent que la persistance du VHB en présence d’anti-HBs n’est pas associée à l’émergence de mutants d’échappement du VHB avec des séquences HBsAg modifiées. nombre de substitutions d’acides aminés ont été trouvés dans les séquences HBsAg dérivées de patients avec et sans anti-HBs. La majorité des substitutions représentait des variations de séquence naturelle et n’étaient vraisemblablement pas liées à l’échappement immunitaire. Certaines substitutions d’acides aminés, telles que QR et IS, ont été La mutation QL a été trouvée dans un isolat HBV d’une personne vaccinée, et elle a réduit la liaison des anti-HBs En revanche, la mutation IS est fréquente dans les isolats de VHB des patients atteints d’infection chronique par le VHB et peut représenter un polymorphisme parmi les isolats du génotype C du VHB [-,], bien que sans signification biologique connue Des études sur ces variations génétiques sont nécessaires pour clarifier leur signification biologique pour la persistance virale Globalement, nos résultats n’appuient pas l’hypothèse de Lada et al selon laquelle la présence d’anti-HB chez les patients atteints d’infection chronique par le VHB conduirait à Sélection des mutants d’échappement du VHB De nombreux patients inclus dans l’étude de Lada et al avaient reçu diverses interventions médicales. Il n’est pas encore clair, mais il est probable que les traitements antiviraux exercent une pression sélective sur HBsAg et, par conséquent, augmentent le taux d’aminoacides. substitutions acides Les anti-HBs présents chez nos patients testés jusqu’ici étaient spécifiques des déterminants du sous-type HBsAg. Il n’est pas complètement exclu qu’une petite fraction d’anti-HBs avec spécificité homologue existait dans des complexes avec HBsAg. Nos résultats indiquent qu’aucun ou seulement quelques anticorps circulants Des complexes d’anti-HBs et d’HBsAg ont été formés dans le sérum du patient. Ainsi, la fraction majeure des anti-HB chez de tels patients avait la « mauvaise » spécification. De manière logique, la présence de tels anti-HBs ne conduirait pas à une sélection de mutants du VHB. La séquence HBsAg de plusieurs patients de cette étude présentait de manière cohérente les séquences de type sauvage. Le clonage et l’expression de HBsAg d’un de ces patients ont clairement confirmé ce fait. Ainsi, pas l’HBsAg muté, mais plutôt la nature des anti-HBs explique la coexistence d’HBsAg et d’anti-HB chez ces patients. Une infection par le VHB provenant de différentes régions de Chine a révélé qu’un pourcentage relativement élevé de ces patients présentaient des taux sériques anti-HBs détectables. On ne sait pas comment les anti-HBs spécifiques aux sous-types ont été induits chez les patients atteints d’infection chronique. induire les anti-HBs au déterminant « y » de HBsAg chez un porteur de chimpanzé du sous-type HBsAg « adw » De même, les vaccinations thérapeutiques avec le sous-type HBsAg adw pourraient induire des anti-HBs spécifiques du sous-type dans Les données non publiées des auteurs ont permis d’obtenir des résultats similaires Ainsi, l’exposition des patients à l’infection par le VHB de différents sous-types ne pouvait être exclue comme explication possible de notre observation. Néanmoins, la présence d’anti-HB chez les patients chroniques L’infection par le VHB suggère que ces patients étaient capables de monter des réponses immunitaires spécifiques au VHB Il sera intéressant de suivre ces patients pour clarifier si la capacité à monter des réponses immunitaires spécifiques au VHB influencerait positivement l’évolution clinique et agirait en synergie avec les agents antiviraux

Remerciements

Nous remercions le Dr Karl Melber d’avoir aimablement fourni des spécimens de HBsAg recombinants, le Dr Wolfram Gerlich pour sa lecture critique et sa discussion utile, et Delia Cosgrove pour son aide dans la préparation du manuscrit. Le soutien financier The Science & amp; Commission de la technologie de la municipalité de Shanghai et à JZ et la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine à JZPotential conflits d’intérêts Tous les auteurs: pas de conflits